胶体金速测
近年来，胶体金免疫层析法快速检测（以下简称“胶体金速测”）作为一种精准度好、灵敏度高、特异性强的检测技术在监管中快速普及，在农兽药残留精准管控、农产品产地准出把关等方面发挥了重要作用。但实践中，一些监管检测人员对胶体金速测原理不清楚、操作不规范，影响胶体金速测效能发挥。现将农业农村部组织梳理的胶体金速测有关知识和注意事项转发，供大家学习掌握。
一、胶体金速测的技术原理
胶体金免疫层析法核心原理在于将胶体金颗粒与特异性抗体结合，通过层析作用实现目标物的可视化检测。胶体金速测按具体原理可细分为多个类别，农兽药、真菌毒素等小分子污染物，因分子结构简单、分子量小，无法同时结合两个抗体，通常采用“竞争法”检测。
竞争法胶体金速测实际上就是农兽药残留和检测线（T线）上的抗原竞争与金标抗体的结合“名额”。胶体金试纸条上有预先吸附的金标抗体，这些金标抗体正常情况下将与T线上的抗原结合显红色，但样品中如有待测的农兽药残留，则会先一步和金标抗体结合，被结合的金标抗体无法再与T线上的抗原结合显色，导致T线最终不显色或显色变弱。待测的农兽药残留浓度越高，T线显色越浅，因此理论上通过T线显色程度，可以计算出待测农兽药残留浓度，一定程度达到定量检测效果。
胶体金试纸条上的质控线（C线）用于验证检测有效性，无论样本是否含有待测农兽药残留，未结合的金标抗体（或多余试剂）都会与C线上“能够识别鼠单抗的抗体”（简称“二抗”）结合显红色。若C线不显色，说明检测无效，需重新检测。
二、胶体金速测与酶抑制法速测的差异对比
20世纪90年代以来，酶抑制法速测在我国基层监管机构普及应用，在防止有机磷和氨基甲酸酯类农药超标等方面发挥了重要作用。近些年，随着高毒农药陆续被禁用或制定严格的残留限量标准，以及大量其他类型常规农药登记使用，酶抑制法对禁用农药因灵敏度不够“检不准”、对常规农药因方法原理不适用“检不出”的问题逐步凸显，胶体金速测法成为新时期实施农兽药残留精准管控的重要手段。
胶体金速测和酶抑制法速测最大的区别在于，前者适用于大多数禁用药物和常规药物残留检测，具有针对性强、特异性高、适用范围广的特点；后者仅能检测34种有机磷和氨基甲酸酯类药物，且检测结果是这34种药物的综合情况，无法判断特定药物残留是否超标。在检测的精准度和灵敏度上，胶体金速测精准度高、灵敏度强，高质量的胶体金速测产品能够依据T线显色的强弱程度定量判断样品中被测农兽药残留的含量；酶抑制法速测精准度和灵敏度较低，且受环境等因素影响大，实践中存在测不准、测不出等问题。目前，胶体金速测法也存在一些局限性，主要是不适用于抗体难以制备的药物，以及可能由于结构类似物的交叉反应导致目标物检测的假阳性，另外目前成本较高。
三、胶体金法速测农兽药残留的注意事项
了解原理、规范操作对保障检测结果准确性至关重要，在应用胶体金速测时需重点注意以下事项。
（一）样本采集与处理：强化代表性，精准控制，避免污染。农产品质量安全检测采样应严格保障代表性，需按照样品特性和批次规模科学采样，确保能够反映整批样本真实情况，杜绝“以点代面”。一是按批次与规模定采样量。按照《农药残留分析样本的采样方法》（NY/T 789-2004）、《动物及动物产品兽药残留监控抽样规范》（NY/T 1897-2010）和《水产品抽样规范》（GB/T 30891-2014）等标准要求进行采样。二是覆盖“风险区域”。果蔬检测采外层与内层、顶部与底部样本，水产品检测采不同生长阶段、水域位置个体。三是记录采样信息。详细记录样本来源背景、批次信息，外观异常样本单独标记说明。四是采样工具需专用。每个样本用独立工具或清洗干净后复用，高浓度农药残留检测工具需纯水冲洗3次以上晾干，畜禽产品检测用高温灭菌工具。五是按检测试剂盒的说明书处理样本。农药残留检测多要求样本剪碎后按1：2—1：5（样本：提取液）比例加提取液，震荡30秒—2分钟，静置2—5分钟取上清液，杂质多则过滤。
（二）检测操作规范：覆盖常规试纸条与金标微孔法，精准把控细节。农兽药残留检测中使用的胶体金试纸条，一般分为常规试纸条和金标微孔法试纸条两类，主要区别在于常规试纸条的金标抗体直接吸附在试纸条的金标垫上，检测时无需额外操作；金标微孔法试纸条的金标抗体则提前冻干/烘干在微孔中，检测时需要先将待测样品提取液和微孔中的金标抗体充分混合，再加入试纸条上。一是常规试纸条操作需严格按流程执行。试纸条取用需谨慎，捏住手柄端，避免触碰反应区域，多样本检测按编号摆放防混淆，开封后1小时内使用，未用的密封放回。样本滴加量需精准，依据试剂盒要求用配套滴管或微量移液器滴加，垂直滴在加样孔中央。反应时间需严格计时，滴加后立即计时，多为5-10分钟，期间不移动、不触摸试纸条，时间到后在自然光下判读，避免强光或弱光。二是金标微孔法操作需关注专用耗材与加样顺序。金标微孔法需用专用微孔板，取出后检查微孔是否异常，样本稀释液冷藏取出后需室温平衡20—30分钟，检查试剂有效期和状态。严格按说明书加样顺序操作，先加样本待检液，移液器轻柔吹吸3—4次，室温孵育3分钟。孵育后用移液器将微孔内液体全部转移至试纸条加样孔，避免残留，反应5—10分钟后按常规试纸条方法判读结果。
（三）检测环境控制：严控温度，减少干扰。基层检测环境多为现场，需重点管控温度和洁净度。温度需实时监测，多数试剂盒要求反应温度10—35℃，低于10℃易导致检测结果假阴性，高于35℃久置影响检测活性；未用完的试纸条（卡）和微孔应立即密封防受潮。环境洁净度需保障，现场检测应铺洁净垫，工作人员戴手套，不触摸试纸条（卡）显色区域，远离异味源，耗材一次性使用，用后统一处理。
（四）结果判读与记录：明确标准，规范追溯。结果判读需熟练掌握标准，农兽药残留等小分子污染物检测多采用比色法，准确性高于消线法。比色法的判读标准为：先看质控线，不显色则结果无效；显色时，T线显色强于或等于C线（T/C值>1）为阴性，弱于C线（T/C值<1）为阳性。消线法中，T线显色为阴性，不显色为阳性。两种方法均可借助读卡仪或手机拍照智能检测判读。记录需完整可追溯，检测后立即填写记录表，内容包括检测相关各类信息，字迹清晰，修改需规范。检测废弃物统一处理，阳性结果需立即封存样本，跟踪后续处理并补充记录。（来源：农业农村部农产品质量安全监管司）